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苏云金芽孢杆菌乳液工业生产技术

* 来源: * 作者: * 发表时间: 2020-03-23 1:38:28 * 浏览: 11
一,概述Bt是苏云金芽孢杆菌的缩写。它是一种芽孢杆菌。那会产生寄生虫的寄生虫晶体,并导致昆虫发病和死亡。其制剂广泛用于农业,农业,水果,蔬菜和城市花园。除害虫。二,生产工艺操作规程(一)块茎细菌的制备1.砂处理:用60-80目筛分后取建筑砂或河砂,用工业Hc浸泡48h,用水洗涤,然后用0.2 NNao中和。 。干燥后,用磁铁去除磁性金属颗粒,并将其放入干净的容器中以备后用。 2.沙土管的制备:将处理过的沙土分散到1.2×12厘米的小试管中,每根约2克,用棉塞塞好,然后以2.0kg / cm2的压力灭菌1.5小时。间歇消毒3次,然后在160°C的温度下干热消毒2小时。无菌测试后,取样一点沙子,并将其放在倾斜的采访管中,并在36°C下孵育24小时。检查无细菌后将使用它。 3.沙状孢子的产生:选择一个生长良好并通过生产能力测试的良好试管,在孢子中加入5ml无菌水,用接种针刮擦孢子制成高浓度的孢子悬浮液,然后吸用无菌吸管吸干。将0.2-0.3ml放入沙管中,然后放入真空干燥器中,用真空泵间歇干燥,用石蜡密封,然后放入0-5°C的冰箱中,并在干燥条件下保存。 (二)斜菌株的制备1.培养基:溶解后的牛肉提取物0.3%,蛋白2 1%,琼脂2%,琼脂7.5-8.0,分装到试管中,塞好,放入试管篮中灭菌。 2.灭菌:在灭菌器中以1.1kg / cm2的蒸汽灭菌30分钟。冷却至60-70°C后,将其取出并放在倾斜的表面上。孵育2天,观察使用前没有细菌。 3.接种培养:将细菌试管的倾斜表面放在接种室或无菌操作箱中,打开紫外线灯30分钟,然后将其关闭。根据操作步骤,使用接种环刮除少许种子细菌苔藓,转移到新鲜的倾斜培养基中进行接种,然后将其置于30°C的培养箱中放置3-4天。检查是否正常后,将其放入冰箱中使用。 (3)扩大扁瓶中种子准备工作1.培养基:组成与斜培养相同,加1%葡萄糖溶解于扁瓶中。 2.灭菌,接种和培养与倾斜细菌相同。 (四)发酵1.培养基中棉籽饼粉3.5%,玉米粉2.0%,鱼粉1.0%,酵母粉0.2%,CaCO30.1%,量油尺0.03%,NoaH的pH调节至8.5,并灭菌至7.0。 2.灭菌:发酵罐进料前应清洗干净,并按50%的进料系数进料。将子过滤器在2kg / cm2的温度下灭菌30分钟,实际的水箱在1.1kg / cm2的温度下灭菌,水箱温度为121-125°C,保持在30。分钟(每个灭菌步骤)。 3.孢子悬浮液的制备:取3至4个栽培的扁瓶种子,加无菌水,将细菌苔藓洗成悬浮液,然后用注射针将其倒入接种瓶中。将该孢子悬浮液在75℃的水浴中处理20分钟。 4.接种:利用压力差将孢子悬浮液通过发酵罐的接种孔注入发酵罐。 5.栽培:罐内压力保持在0.3-0.5kg / cm2,搅拌为220 rpm,接种前4小时通风量较小,逐渐增加到1:1,温度为30°C在上述条件下,细菌的生长和发育时间为:0至4小时,调整后的生长时间,5至12小时,生长和繁殖时间,13至20小时,孢子晶体形成时间,21至坦克,孢子晶体成熟期。 6.检测:在培养过程的4、8、12、16、20等过程中,分别采集每个样品以测试其生长和pH值,最后采集一个样品以确定细菌数。 (5)宝发酵液的预处理1.用工业盐酸将发酵的发酵液的pH调节至5.0-6.5。 2.使用薄膜浓缩器(或离心机)进行真空浓缩。 3.检测:根据发酵液中的细菌数量和浓度倍数,估计发酵中的细菌数量为每毫升100亿,当检测达到产品质量标准时可以终止浓度。然后压入储水箱。 4.添加剂:按规定加入NaCl1%和苯甲酸钠0.3%,搅拌均匀。 5,成品检验:(1)质检部门按照产品质量标准检验成品指标后,发出包装通知书。 (2)包装:装在1升的塑料瓶中,瓶子有内,外盖,并且不会泄漏。包装应符合产品库存,搬运和运输的技术和安全要求。包装盒中应包含产品证书和说明手册。 4. Bt乳液的主要生产设备清单:附录1:Bt乳液的质量检验方法:A,Bt乳液的孢子数测定:A1原理在光学显微镜下用血细胞计数板对孢子数进行计数,然后使用公式计算每1毫升产品中含有孢子。 A2仪器血细胞计数板,光学显微镜等。A3操作A3·1晶体处理摇动待测样品后,迅速吸取10 ml的等量0.5N NaoH溶液,间歇摇动,处理1次。 -2小时使所有晶体自动溶解,直到显微镜上没有晶体为止。 。将A3·2稀释在500毫升三角瓶中(内有玻璃珠),用99.5毫升无菌水填充,摇晃用NaoH处理的样品,然后用移液管迅速将0.5毫升A3·2吸到三角瓶中。共400次))。对于A3·3载玻片,从已摇匀的400倍稀释溶液中吸取少量,然后从盖玻片的一端注入血细胞计数板,以使细菌溶液渗入载玻片之间,然后使用滤纸以沥干多余的东西。细菌液体,血细胞计数板在操作过程中不得产生气泡,否则应重做。数15分钟。 A3·4观察读出孢子的数量,并用低倍显微镜观察。使用25×16计数板计算四个中间正方形中的孢子数,以及四个角中间的一个孢子数。转换为1 ml细菌溶液中孢子的总数。 A4计算每1毫升产品的孢子数,计算方法如下:A = B×C×5×104其中A是1毫升细菌溶液中1毫升的孢子数(亿/毫升)。这个样本。 B是五个中国方块中孢子的总数。 C是稀释因子。 5×104是常数,即血细胞计数板每个体积中的细菌数转换为1 ml中的细菌数。注意:如果用16×25血细胞计数板进行计数,请使用以下公式计算:A = B×C×3.2×104B,Bt乳剂和毒性作用的测定:B1测试昆虫的采集:人工繁殖或田间采集(在具体在该区域内的同一植物上收集,具有相同的年龄(第一龄或第二龄),以及生长良好的健康昆虫(通常使用菜青虫,但应避免在最近未喷洒的农作物上使用),在室内观察1 -2天后备用。 B2洗净所有餐具,用1kg / cm2的蒸汽消毒30分钟,然后放在一旁。 B3操作B3·1将样品稀释500、1000、1500、2000次,并为每种浓度设置3个重复样品。 B3·2使用300px培养皿或罐头瓶作为容器,其中放入2-3片白菜叶,并将细菌液涂在蔬菜片上(正反两面)。同时建立一个对照组。 B3·3在27-28℃光照下饲养试验幼虫。 B4结果记录在试验后24、48和72小时观察并记录死亡和活昆虫的数量和昆虫and的数量。观察结果列于下表。白菜线虫72小时死亡率计算计算公式如下:死虫死亡率(%)=×100被测昆虫注1:在计算和统计过程中,化学虫的数量不参与死亡率计算。注2:如果对照组的死亡率≥5%,应校正死亡率。校正方法如下:对照组的活虫数-校正后的活体死亡率(%)=×100的活虫数。 3:如果没有白菜虫,可以用第二龄蚕代替,测试方法没有改变。 C,PH值测量:使用精密的pH试纸。附件2:Bt制备说明手册[简介]本产品是高效微生物农药。它对人类和动物无害,不伤害天敌,没有污染,而且价格便宜。它可以广泛用于农业,森林,水果,蔬菜和城市花园中的害虫防治。它对建立无公害的蔬菜,烟草和茶叶经济作物种植区具有极好的推广价值。实践证明,我厂生产的Bt乳剂不仅具有明显的杀虫作用,而且有效期长,并带来了广泛的社会效益和生产效益。它可以完全替代某些剧毒农药,例如氨基磷酰胺钾。 [性状]液体剂型(粘稠稠稠的乳状液体)[规格]每毫升的孢子数超过100亿,孢子比为1:1。[用法]英亩数通常为2雄性。低水位喷雾。详细信息请参见下表:注意:(1)添加少量化学农药可提高效率,(2)本产品有效期一年。避免接触热源