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“中光”菌株的真空冷冻干燥保存方法

* 来源: * 作者: * 发表时间: 2020-06-08 0:46:40 * 浏览: 5
真空冷冻干燥保存方法这种菌株保存方法保存期长(约5年以上),变化小,适用范围广。它是目前理想的保存方法,是各种保存机构广泛使用的主要保存方法。例如,据报道,在由ATCC保藏的6,500多个菌株中,用这种方法不能保存少于100个。原理是创建干燥和低温的存储环境。基本方法是在低温(-15℃)下快速冷冻微生物细胞或孢子,以保持菌株的细胞完整,然后在减压下升华水,从而使细胞等的生长和代谢生活活动被停止该状态可以保存很长时间。操作步骤如下:①安瓿管的操作安瓿管的内径一般为8至10mm,长度不小于100m。首先在洗涤液中加入毛细管,然后浸泡过夜,然后用蒸馏水洗涤并干燥,在瓶口中加入棉塞,用纸包好,在121℃下灭菌30分钟,取出并在60℃下干燥。 ℃烤箱。 ②保护剂的作用是维持细菌细胞的生命状态,并最大程度地减少冷冻干燥过程中微生物对冷冻细胞的破坏。保护剂也可以起辅助作用,从而使微生物松散地固定在其上。该保护剂可以使用低分子和高分子化合物,例如氨基酸,有机酸,糖,蛋白质,多糖等。常用的是脱脂奶和血清。例如,向马血清或马血清中添加7.5%的葡萄糖。使用前,应通过适当的方法对保护剂进行灭菌。 ③细菌悬液制剂应在最合适的培养条件(如培养基,温度,培养时间等)下进行培养,以获得良好的培养效果,可长期保存。培养时间应控制在生长后期,因为处于对数生长期的细胞对冷冻干燥的抵抗力较弱,产生孢子的微生物必须适当延长培养时间才能获得成熟的孢子。通常,将细菌培养24至48小时,酵母培养72小时,放线菌和丝状真菌培养7至10天以上。在操作过程中,在无菌条件下将少量保护剂添加到倾斜表面,然后轻轻刮去细菌的苔藓或孢子以制成细菌悬液。使用毛细管滴管,取0.1到0.2 ml细菌悬浮液,将其添加到无菌安瓿瓶中,然后塞上棉塞。 ④冻干温度为-15℃〜-30℃。装有细菌悬液的安瓿瓶管应尽快冷冻,以防止细菌沉淀到不均匀的细菌悬液中,以及防止微生物重新生长或孢子萌发。达到冷冻温度后,立即启动真空泵,真空度在15分钟内达到66.661 Pa。真空度升高到13.33322Pa以上,可使温度升高到25〜30℃。此时,由于升华继续进行,因此样品不会熔化。干燥完成后,关闭真空泵,排气,取下多孔管上的安瓿管,然后进行真空密封。 ⑤安瓿瓶管的存放安瓿瓶管在4至5°C的温度下可存放5至10年,在室温下的保存效果不好。影响保鲜效果的因素除了应变和年龄外,还与样品中的水分含量直接相关,通常当水分含量为1%至3%时,保鲜效果更好;当水分含量为1%至3%时,保鲜效果会相应降低。水分含量为5%至6%。当水量超过10%时,样品很难保存。